關于色譜柱的平衡，這一點也是一般書中不會多講的，但是實際工作中很容易遇到的，當然，由于引起峰形異常的原因非常明確——僅僅是柱子未平衡完全，所以下文中主要談到的是如何平衡以及不合理的平衡措施所產(chǎn)生的影響。

　　色譜柱平衡未完全也會引起峰形的變化，當然，未平衡完全更多情況下會帶來保留時間的變化。關于這一點，我們今天暫時不考慮，該話題放到今后保留時間的話題中再討論。由于平衡未完全導致的峰形失真通常伴隨著保留時間的改變。

　　在我們把柱子安裝到儀器中前，必須確認儀器中原有管路中的試劑跟色譜柱保存試劑是相容的。如果不相容，需要在接上柱子前先打開purge閥把儀器管路中的試劑過渡并切換成與色譜柱保存試劑相容的試劑。

　　特別需要關注系統(tǒng)正反相切換的時候：對于反相色譜柱，可能會因為正反相不相容而使接下去的實驗出現(xiàn)不可估計的異?，F(xiàn)象；而對于正相硅膠柱，或者氧化鋁色譜柱，或者某些涂覆型手性柱，它們對水非常敏感，很可能會讓接下去的實驗中讓色譜峰嚴重變形，并且可能對色譜柱造成不可逆的損壞，所以在正反相的切換中需要切換完全。這里額外多提一次，由于水極性非常大，殘留的水分對正相體系的影響非常大，哪怕是極微量的水分。

　　不管是正相切換到反相還是反相切換到正相，第一步都是把系統(tǒng)中原有的酸、堿、或者其他添加劑置換完全，然后過渡到乙醇/異丙醇或者其他過渡溶劑；最后置換成接下去所需使用的體系。

　　即便都是在反相色譜中的切換，也需要過渡完全。通常，反相色譜柱會保存在純甲醇或者純乙腈當中，反相色譜流動相緩沖液中很多情況下會加入緩沖鹽，如果不經(jīng)過置換，含鹽緩沖液與純有機相相遇，很容易產(chǎn)生鹽析。一旦產(chǎn)生鹽析，很可能損壞柱床。為了避免這種情況的發(fā)生，在過渡到所使用的帶緩沖鹽的流動相前，先使用1~3個柱體積的50%體積比的甲醇水過渡一下，然后再轉到緩沖鹽體系平衡即可。

　　同理，因為正己烷只能跟甲醇/乙腈只能部分混溶，用于正相體系保存的正己烷過渡到反相，需要合適的溶劑過渡；而用水相緩沖液保存的離子交換柱的過渡，也需要合適的溶劑過渡。

　　一般來說10~20柱體積的平衡就可讓色譜柱達到平衡狀態(tài)。當然，在使用了離子對或者胺類改性劑的體系中，平衡時間需要適當延長，以達到完全平衡的目的。

　　色譜柱的平衡非常簡單，關注點更多在一些細節(jié)上。只要在工作過程當中多加注意，仔細一些，便能達到較好的效果。當然，平衡時間并不是越長越好，從經(jīng)濟角度看，在盡可能短的時間內(nèi)使柱子達到平衡，不僅節(jié)省了時間，還節(jié)省了試劑。這一點，從環(huán)保角度看也是非常好的。